La pinacothèque Ambrosienne (en italien : Pinacoteca Ambrosiana) est un musée d'art situé à Milan, en Italie. Fondée en avril 1618 par le cardinal Federico Borromeo, elle fait partie de l'ensemble institutionnel de la Bibliothèque Ambrosienne et est installée dans le palazzo dell'Ambrosiana, au centre historique de la ville.

La pinacothèque naît de la donation par Borromeo de sa collection personnelle de peintures, de sculptures et de dessins à la bibliothèque qu'il avait établie en 1607. Conçue dans le contexte culturel de la Contre-Réforme, l'institution avait pour objectif de servir à la fois de collection accessible au public et de support pédagogique pour l'Accademia del Disegno, destinée à la formation des artistes.

Les collections comprennent aujourd'hui environ 1 500 œuvres, principalement des peintures et des arts graphiques, couvrant une période allant de la Renaissance au début du XX^e siècle. Parmi les œuvres conservées figurent le Portrait de musicien de Léonard de Vinci, la Corbeille de fruits du Caravage et le carton préparatoire de L'École d'Athènes de Raphaël.

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